![سامانه نشر مجلات علمی دانشگاه تهران](./data/logo.png)
تعداد نشریات | 162 |
تعداد شمارهها | 6,578 |
تعداد مقالات | 71,072 |
تعداد مشاهده مقاله | 125,684,183 |
تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 98,913,681 |
جداسازی، تخلیص و بررسی خاصیت باکتری کشی کال پروتکتین از نوتروفیل های خون گاو | ||
مجله تحقیقات دامپزشکی (Journal of Veterinary Research) | ||
مقاله 8، دوره 71، شماره 1، فروردین 1395، صفحه 57-64 اصل مقاله (1.45 M) | ||
شناسه دیجیتال (DOI): 10.22059/jvr.2016.57401 | ||
نویسندگان | ||
مهدی ایمانی1؛ امیر توکمه چی* 2 | ||
1گروه علوم پایه، دانشکده دامپزشکی دانشگاه ارومیه، ارومیه- ایران | ||
2گروه میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه ارومیه، ارومیه- ایران | ||
چکیده | ||
زمینه مطالعه: نوتروفیلهای گاو پپتیدهای یاختهکشی تولید میکنند که باعث از بین بردن میکروارگانیسمهای قارچی و باکتریایی از جمله عامل ماستیت میشوند. هدف: استخراج و تخلیص پروتئین P7/P23 گاوی و بررسی فعالیت ضد باکتریایی آن علیه باکتریهای Staphylococcus aureus، Aeromonas hydrophila و Yersinia ruckeri بود. روش کار: ابتدا یاختههای نوتروفیل گاو توسط روش رسوبدهی با دکستران و سانتریفیوژ روی فایکول از سایر یاختههای خون سالم جداسازی گردیدند. سپس زندهمانی آنها با کمک تریپان بلو تعیین و پس از خرد کردن آنها با سونیکاتور مقدار پروتیئنهای تام سیتوزولی توسط سانتریفیوژ جداسازی شد. در مرحله بعد، پس از جداسازی به منظور تخلیص ابتدا دیالیز و سپس کروماتوگرافی تعویض یونی دو مرحلهای صورت گرفت. بررسی فعالیت ضد یاختهای آن، با روشهای تعیین حداقل غلظت مهار کنندگی، حداقل غلظت کشندگی و آزمون انتشار در آگار بررسی شد. نتایج: یاختههای نوتروفیل با زندهمانی بیشتر از 95% جداسازی شدند. نتایج کروماتوگرافی و الکتروفورز ژل پروتئین نشان داد که پروتئین هترودیمر P7/P23 با موفقیت طی دو مرحله تخلیص شده است (مرحله اول حدود 60% و در مرحله دوم با خلوص بیشتر از 95%). وزن مولکولی هر کدام از منومرهای کوچک و بزرگ به ترتیب kDa7 و 23 تعیین شد. پروتئین تخلیص شده دارای فعالیت باکتری کشی بوده و تأثیر آن بر یرسینیا روکری (µg/ml 64) بیشتر از دو باکتری دیگر بود. نتیجهگیری نهایی: پروتئین تخلیص شده در طی فرایند تخلیص فعالیت خود را حفظ میکند. به علاوه فعالیت ضد باکتریایی نوتروفیل میتواند ناشی از پروتئین P7/P23 باشد. | ||
کلیدواژهها | ||
ضد یاخته؛ کال پروتکتین؛ جداسازی؛ نوتروفیل | ||
مراجع | ||
Bradford, M.M. (1976) A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 72: 248-254.## Dell’Angelica, E.C., Schleicher, C.H., Simpson, R.J., Santome, J.A. (1996) Complex assembly of calgranulins A and B, two S100-like calcium-binding proteins from pig granulocytes. Int J Biochem Cell Biol. 28: 53-62.## Dianoux, A.C., Stasia, M.J., Garin, J., Gaqnon, J., Viqnais, P.V. (1992) The 23-kilodalton protein, a substrate of protein kinase C in bovine neutrophil cytosol is a member of the S100 family. Biochem. 31: 5898-5905.## Donato, R. (1999) Functional roles of S100 proteins, calcium-binding proteins of the EF-hand type. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)- Mol. Cell Res. 1450: 191-231.## Doussiere, J., Bouzidi, F., Vignais, P.V. (2002) The S100A8/A9 protein as a partner for the cytosolic factors of NADPH oxidase activation in neutrophils. Europ J Biochem. 269: 3246-3255.## Gennaro, R., Dolzani, L., Romeo, D. (1983) Potency of bactericidal proteins purified from the large granules of bovine neutrophils. Infect Immun. 40: 684-690.## Grieve, P.A., Mattila T. (1989) Non-oxidative antibacterial activity of bovine neutrophil granule proteins towards mastitis pathogens. J Vet Med. 36: 500-508.## Heilmann, R.M., Suchodolski, J.S., Steiner, J.M. (2008) Purification and partial characterization of canine calprotectin. Biochim. 20: 1306-1315.## Katircioglu, H.Y.B., Aslim, B., Yüksekdag, Z., Atic, T. (2005) Screening for Antimicrobial Agent Production of SomeFreshwater. Internet J Microbiol. 2: 123-131.## Liu, J.Z., Jellbauer, S., Poe, A.J., Ton, V., Pesciaroli, M., Kehl-Fie, T.E., Restrepo, N.A., Hosking, M.P., Edwards, R.A., Battistoni, A., Pasquali, P., Lane, T.E., Chazin, W.J., Vogl, T., Roth, J., Skaar, E.P., Raffatellu, M. (2012) Zinc Sequestration by the Neutrophil Protein Calprotectin Enhances Salmonella Growth in the Inflamed Gut. Cell Host Microbe. 11: 227-239.## Loomans, H.J., Hahn, B.L., Li, Q.Q., Phadnis, S.H., Sohnle, P.G. (1998) Histidine-based zinc-binding sequences and the antimicrobial activity of calprotectin. J Infect Dis. 177: 812-814.## Mark, T., Quinn, F.R.D., Gary M.B. (2007) Neutrophil Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology). (1st ed.) Humana Press Inc, New Jersy, USA. ## Regenhard, P., Leippe, M., Schubert, S., Podschun, R., Kalm, E., Grötzinger, J., Looft, C. (2009) Antimicrobial activity of bovine psoriasin. Vet Microb. 136: 335-340.## Qaiyami, S. (2007) Macro and microdilution methods of antimicrobial susceptibility testing. In: Antimicrobial Susceptibility Testing Protocols. Schwalbe, R., Steele-Moore, L., Goodvin, A.C. (eds.). (1st ed.). Taylor and Francis Group, New York, USA. p. 75-79.## Schagger, H. (2006) Tricine-SDS-PAGE. Nat Prot. 1: 16-22.## Schleicher, C.H., Dell’Angelica, E.C., Santome, J.A. (1993) Isolation and N-terminal sequence of two low molecular weight calcium-binding proteins from pig granulocytes. Int J Biochemi. 25: 1251-1256.## Skoog, W.A., Beck, W.S. (1956) Studies on the fibrinogen, dextran and phytohemagglutinin methods of isolating leukocytes. Blood. 11: 436-454.## Stasia, M.J., Dianoux, A.C., Vignais P.V. (1989) A 23-kDa protein as a substrate for protein kinase C in bovine neutrophils. Purification and partial characterization. Biochem. 28: 9659-9667.## Yang, T.H., Tzeng, S., Cheng, I., Burnett, M.G., Yoshizawa, Y., Fukoyama, K., Lee, S.C., Epstein, W.L. (1997) Identification of the mouse calcium-binding proteins, MRP 8 and MRP 14, in Schistosoma mansoni-induced granulomas: biochemical and functional characterization. J Leukoc Biol. 61: 258-266.## Yui, S., Mikami, M., Yamazaki, M. (1995) Purification and characterization of the cytotoxic factor in rat peritoneal exudate cells: its identification as the calcium binding protein complex, calprotectin. J Leukoc Biol. 58: 307-316.## Yui, S., Nakatani Y., Mikami M. (2003) Calprotectin (S100A8/S100A9), an inflammatory protein complex from neutrophils with a broad apoptosis-inducing activity. Biol Pharma Bull. 26: 753-760.## | ||
آمار تعداد مشاهده مقاله: 1,323 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 1,687 |