طراحی و ایجاد موتاسیون در ژن wbk A بروسلا آبورتوس S19 به روش Overlap Extension PCR | ||
| مجله تحقیقات دامپزشکی (Journal of Veterinary Research) | ||
| مقاله 11، دوره 70، شماره 3، 1394، صفحه 317-323 اصل مقاله (1.05 M) | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22059/jvr.2015.55276 | ||
| نویسندگان | ||
| سولماز ناصرلی1؛ تقی زهرایی صالحی1؛ بهار نیری فسایی* 1؛ علیرضا سعیدی نیا2؛ ایرج اشرافی تمامی1 | ||
| 1گروه میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران | ||
| 2گروه فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر | ||
| چکیده | ||
| زمینه مطالعه: ایجاد موتاسیون در جایگاه اختصاصی میتواند یکی از روشهای کارآمد جهت بررسی ویژگی و خواص تنظیمی ژنهای گوناگون باشد. ﺑﺮوﺳﻠﻮز از ﻣﻬﻢ ﺗﺮﯾﻦ ﺑﯿﻤﺎریهای ﻋﻔﻮﻧﯽ ﻣﺸﺘﺮک ﺑﯿﻦ اﻧﺴﺎن و دام اﺳﺖ ﻛﻪ ﻣﻨﺠﺮ ﺑﻪ بروز ﺿﺮرهاى اﻗﺘﺼﺎدى ﻓﺮاواﻧﻰ ﻣﻰ ﺷﻮد. ﺑﻨﺎﺑﺮاﯾﻦ ﺷﻨﺎﺳﺎﯾﯽ ﻋﻮاﻣﻞ پاتوژن و اﯾﻤﻨﯽ زا در جنس ﺑﺮوﺳﻼ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان راهگشای ﺟﻬﺖ ﮐﻨﺘﺮل اﯾﻦ ﻣﻌﻀﻞ ﺑﻬﺪاﺷﺘﯽ ﻣﻄﺮح ﻣﯽﺑﺎﺷﺪ. هدف: با توجه به اهمیت جهش هدفدار در شناسایی ساختار ژنوم و وجود روشهای متعدد جهت دست یابی به این هدف، روش Overlap Extension PCR به عنوان یک تکنیک اصلاح شده جهت حذف و جایگزینی ژن هدف معرفی میشود. روش کار: جهت انجام این تحقیق، با انجام دو مرحله PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، قطعات بالادست و پایین دست ژن هدف از ژنوم باکتری و کاست مقاومت آنتی بیوتیکی از پلاسمیدa(+)رpET28، تکثیر یافته و به یکدیگر اتصال یافتند. قطعه حاصله با استفاده از آنزیمهای محدودالاثر که توالی آنها در انتهای ´5 پرایمرهای خارجی قرار داده شده است، در جایگاه اختصاصی از پلاسمید (-) pBluescriptIISKهمسانه سازی شده و پس از حصول اطمینان از عدم ایجاد جهش خودبخودی در حین مراحل PCR، با استفاده از روش الکتروپوریشن به داخل ژنوم بروسلا آبورتوس انتقال یافت. نتایج: همسانه سازی محصول PCR اتصالی که بدون بروز تغییر در توالی نوکلئوتیدی حاصل شده بود، داخل پلاسمید (-) pBluescriptIISK انجام شد و پس از انتقال الکتریکی پلاسمید به ژنوم بروسلا آبورتوس، طی عمل ریکامبینیشن باعث جهش در ژن مورد نظر گردید. نتیجه گیری نهایی: نتایج این مطالعه نشان میدهد که Overlap Extension PCR یک تکنیک بهینه و اصلاح شده به منظور ایجاد جهش در ساختار ژنوم باکتری بوده و به راحتی میتواند در خانواده بروسلا استفاده گردد. | ||
| کلیدواژهها | ||
| بروسلا آبورتوس؛ جهش؛ overlap extension PCR | ||
| مراجع | ||
|
| ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,224 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 2,299 |
||