تعداد نشریات | 161 |
تعداد شمارهها | 6,532 |
تعداد مقالات | 70,501 |
تعداد مشاهده مقاله | 124,114,597 |
تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 97,218,346 |
اثر تعداد سلولهای گرانولوزا در محیط کشت در بیان ژن آنزیمهای مؤثر در ساخت هورمونهای استروییدی | ||
مجله تحقیقات دامپزشکی (Journal of Veterinary Research) | ||
مقاله 6، دوره 70، شماره 2، تیر 1394، صفحه 155-161 اصل مقاله (988.43 K) | ||
شناسه دیجیتال (DOI): 10.22059/jvr.2015.53732 | ||
نویسنده | ||
عیسی دیرنده* | ||
گروه علوم دامی، دانشکده علوم دامی و شیلات دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری، ساری-ایران | ||
چکیده | ||
زمینه مطالعه: سلولهای گرانولوزا دارای نقشی کلیدی در مسیر استروئیدوژنسیز هستند. هدف: از مطالعه حاضر بررسی تراکم سلولهای گرانولوزا کشت داده شده حاصل از فولیکولهای mm 5-2بر تراوش استرادیول و بیان ژنهای مرتبط با ساخت استرادیول و پروژسترون بود. روش کار: به طور خلاصه، فولیکولهای mm 5-2 از تخمدان گاوهای بالغ از کشتارگاه جمع آوری شدند، پس از جدا سازی و شمارش سلولها با استفاده از رنگ تریپان بلو 4/0%، سلولهای گرانولوزا در محیط DMEM/F12 به مدت شش روز کشت داده شدند. تیمارها شامل 1) 500 هزار سلول در mL500 محیط کشت، 2) 500 هزار سلول در mL 200 محیط کشت، 3) 250 هزار سلول در mL500 محیط کشت و 4) 250 هزار سلول در mL200 محیط کشت بود. دادههای مربوط به بیان ژنها با استفاده از نرم افزار JMP مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. نتایج: در شرایطی که مقدار محیط کشت ثابت بود کاهش تعداد سلولها (کاهش تراکم) منجر به افزایش غلظت استرادیول گردید و در شرایطی که تعداد سلولها ثابت بود کاهش محیط کشت (افزایش تراکم) سبب کاهش غلظت استرادیول گردید. میزان پروتئین و RNA استخراجی تفاوتی بین تیمارها نداشت. با کاهش تراکم بیان ژنهای FSHR، CYP19، 17βHSD افزایش و بیان ژنهای GADD45β و StAR کاهش یافت. نتایج مطالعه حاضر نشان داد کاهش تراکم سلول سبب افزایش تولید استرادیول و همچنین افزایش mRNA کد کننده آنزیمهای استروژنیک گردید ولی بالعکس سبب کاهش بیان mRNA کد کننده آنزیمهای پروژستژنیک (Progestagenic) گردید. نتیجهگیرینهایی: غلظت پروتئین با کاهش تراکم سلول تغییر نکرد در نتیجه میتوان سلول را از اثرات مضر افزایش تراکم محافظت کرد. | ||
کلیدواژهها | ||
کشت سلول؛ سلول گرانولوزا؛ گاو هلشتاین؛ RIA؛ PCR | ||
مراجع | ||
Adams, G.P., Matteri, R.L., Kastelic, J.P., Ko, J.C., Ginther, O.J. (1992) Association between surges of follicle-stimulating hormone and the emergence of follicular waves in heifers. J Reprod Fertil. 94: 177–88. Baerwald, A.R., Adams, G.P., Pierson, R.A. (2003) Characterization of ovarian follicular wave dynamics in women. Biol Reprod. 69: 1023–31. Bar-Ami, S., Gitaxy-Goren, H. (1993) Altered steroidogenic activity of human granulosa-lutein cells at different cell densities in culture. Mol Cell Endocrinol. 90: 157–64. Belanger, A., Couture, J., Caron, S., Roy, R. (1990) Determination of nonconjugated and conjugated steroid levels in plasma and prostate after separation on C-18 columns. Ann NY Acad Sci. 595: 251–9. Campbell, B.K., Scaramuzzi, R.J., Webb, R. (1996) Induction and maintenance of oestradiol and immunoreactive inhibin production with FSH by ovine granulosa cells cultured in serumfree media. J Reprod Fertil. 106: 7–16. Campbell, B.K., Souza, C., Gong, J., Webb, R., Kendall, N., Marsters, P. (2003) Domestic ruminants as models for the elucidation of the mechanisms controlling ovarian follicle development in humans. Reprod Suppl. 61: 429–43. Franks, S., Stark, J., Hardy, K. (2008) Follicle dynamics and anovulation in polycystic ovary syndrome. Hum Reprod Update. 14: 367–78. Gonzalez-Robayna, I. J., Alliston, T. N., Buse, P., Firestone, G.L., Richards, J.S. (1999) Functional and subcellular changes in the A-kinase–signaling pathway: relation to aromatase and Sgk expression during the transition of granulosa cells to luteal cells. Mol Endocrinol. 13: 1318–37. Gutierrez, C.G., Campbell, B.K., Webb, R. (1997) Development of a long-term bovine granulosa cell culture system: induction and maintenance of estradiol production, response to follicle-stimulating hormone, and morphological characteristics. Biol Reprod. 56: 608–16. Grimes, R.W., Ireland J.J. (1986) Relationship of macroscopic appearance of the surface of bovine ovarian follicles concentrations of steroids in follicular fluid, and maturation of oocytes in vitro. Biol Reprod. 35: 725–32. Henderson, K.M., McNatty, K.P., Smith, P., Gibb, M., O’Keeffe, L.E., Lun, S. (1987) Influence of follicular health on the steroidogenic and morphological characteristics of bovine granulosa cells in vitro. J Reprod Fertil. 79: 185–93. Hoffman, B., Liebermann, D.A. (2009) GADD45 modulation of intrinsic and extrinsic stress responses in myeloid cells. J Cell Physiol. 218: 26–31. Ireland, J.J., Roche, J.F. (1983) Development of nonovulatory antral follicles in heifers: changes in steroids in follicular fluid and receptors for gonadotropins. Endocrinology. 112: 150–6. Jimenez-Krassel, F., Ireland, J.J. (2002) Development and validation of a shortterm, serum-free culture system for bovine granulosa cells: evaluation of the effects of somatotropin and growth hormone-releasing factor on estradiol production. J Dairy Sci. 85: 68–78. Lambert, A., Harris, S.D., Knaggs, P., Robertson, W.R. (2000) Improved FSH sensitization and aromatase assay in human granulosa-lutein cells. Mol Hum Reprod. 6: 677–80. Lindeberg, M., Carlstrom, K., Ritvos, O., Hovatta, O. (2007) Gonadotrophin stimulation of nonluteinized granulosa cells increases steroid production and the expression of enzymes involved in estrogen and progesterone synthesis. Hum Reprod. 22: 401–6. Murphy, B.D. (2000) Models of luteinization. Biol Reprod. 63: 2–11. Rosenfeld, C.S., Wagner, J.S., Roberts, R.M., Lubahn, D.B. (2001) Intraovarian actions of oestrogen. Reproduction. 122: 215–226. Sahmi, M., Nicola, E.S., Silva, J.M., Price, C.A. (2004) Expression of 17b- and 3b-hydroxysteroid dehydrogenases and steroidogenic acute regulatory protein in nonluteinizing bovine granulosa cells in vitro. Mol Cell Endocrinol. 223: 43–54. Sen, A., Bettegowda, A., Jimenez-Krassel, F., Ireland, J.J., Smith, G.W. (2007) Cocaine and amphetamine-regulated transcript regulation of follicle-stimulating hormone signal transduction in bovine granulosa cells. Endocrinology. 148: 4400–10. Silva, J.M., Price, C.A. (2000) Effect of folliclestimulating hormone on steroid secretion and messenger ribonucleic acids encoding cytochromes P450 aromatase and cholesterol sidechain cleavage in bovine granulosa cells in vitro. Biol Reprod. 62: 186–91. Sirois, J., Fortune, J.E. (1988) Ovarian follicular dynamics during the estrous cycle in heifers monitored by real-time ultrasonography. Biol Reprod. 39: 308–17. Vallerio, P.M., Gustavo, Z., Price, C.A. (2010) Cell plating density alters the ratio of estrogenic to progestagenic enzyme gene expression in cultured granulosa cells. Fertil Steril. 93: 2050- 2055. Zheng, X., Price, C.A., Tremblay, Y., Lussier, J. G., Carriere, P.D. (2008) Role of transforming growth factor-b1 in gene expression and activity of estradiol and progesterone-generating enzymes in FSH-stimulated bovine granulosa cells. Reproduction. 136: 447–57. | ||
آمار تعداد مشاهده مقاله: 1,912 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 1,744 |