پیوندهای مفید
اخبار و اعلانات
آمار
| تعداد نشریات | 158 |
| تعداد شماره‌ها | 6,228 |
| تعداد مقالات | 67,752 |
| تعداد مشاهده مقاله | 115,086,218 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 89,825,381 |
بررسی پروموتور CaMV 35S با استفاده از ژن گزارشگرGUS در کلزای (Brassica napus) تراریخت | ||
| مجله علوم کشاورزی ایران | ||
| مقاله 10، دوره 35، شماره 3 - شماره پیاپی 1654، خرداد 1383 اصل مقاله (303.56 K) | ||
| نویسندگان | ||
| مختار جلالی جواران؛ قادر میرزا قادری؛ علی محمد شکیب* | ||
| چکیده | ||
| نظر به اینکه بخش اعظم روغن خوراکی کشور (بیش از 90%) از خارج تأمین می‌گردد، لذا افزایش تولید دانههای روغنی به منظور قطع وابستگی کشور ضرورت دارد. از بین نباتات روغنی، کلزا از اهمیت خاصی برخوردار است و اصلاح برای کمیت و کیفیت روغن آن لازم است. با توجه به اینکه اصلاح گیاه روغنی کلزا با استفاده از روشهای کلاسیک وقتگیر، پرهزینه و گاهی غیر ممکن است، در نتیجه استفاده از تکنیکهای نوین بیوتکنولوژی و مهندسی ژنتیک اجتنابناپذیر است. مهمترین بخش هر ژن پروموتور آن است که در این تحقیق سعی شده است تا با استفاده از ژن گزارشگر GUS بررسی دقیقی در خصوص وضعیت فعالیت پروموتور ویروس موزائیک گل کلم (CaMV 35S) از نظر میزان، مکان و زمان بیان ژن صورت پذیرد. در صورت مناسب بودن پروموتور مذکور و با توجه به نحوة بیان ژن گزارشگر (GUS) ?-glucuronidase میتوان از آن به منظور کنترل سایر ژنهای مورد نظر استفاده نمود. بدین منظور ابتدا در پروژة مستقلی ژن GUS در ناحیة پایین دست پروموتور CaMV 35S کلون شده و به گیاه کلزا منتقل گردیده بود. در این تحقیق بذور 7 بوته کلزای تراریختشده (نسل T0) به همراه بذور گیاه شاهد (غیر تراریخت) در گلخانه کشت شد. پروتئین محلول در چهار مرحلة رشدی (شامل رزت، غنچهدهی، تشکیل غلاف و پیری) استخراج و با استفاده از اسپکتروفتومتری، غلظت پروتئین محلول مشخص گردید. مقادیر کلروفیلهای a، b، و کاروتنوئید بر اساس میزان جذب نور عصارة استخراج شده در طول موجهای 470، 646 و nm 663 اندازه گیری و مورد تجزیه و تحلیل آماری قرار گرفت. اختلاف معنیداری بین گیاهان تراریخت و شاهد از نظر میزان پروتئین، کلروفیل و کاروتنوئید مشاهده نشد ولی میزان این ترکیبات در مراحل مختلف رشدی متفاوت بوده و در مرحلة تشکیل غلاف به حداکثر میزان خود رسید. علاوه بر مطالعة میزان کمی کلروفیل، کاروتنوئید و پروتئین، الگوهای باندی پروتئینها در تیمارهای تراریخت و شاهد به روش SDS-PAGE بررسی شد. در گیاهان تراریخت باند پروتئینی جدید در مقایسه با شاهد در هیچ مرحله‌ای مشاهده نشد. با توجه به نتایج حاصل از مقایسة کلروفیل، کاروتنوئید و پروتئین (از نظر کمی و کیفی) میتوان نتیجه گرفت که انتقال ژن GUS در ناحیة پایین دست پروموتور CaMV 35S به کلزا باعث ایجاد تغییرات معنیداری در مقادیر رنگدانهها و پروتئین کل محلول گیاه (از نظر کمی و کیفی) نمیگردد. با توجه به مشاهده رنگ آبی در بافتهای مختلف گیاهان تراریخت (شامل: برگ، ساقه، گل و غلاف) و در مراحل مختلف رشد گیاهان (شامل رزت، غنچهدهی، تشکیل غلاف و پیری) می توان نتیجه گرفت که پروموتر CaMV 35S یک پروموتر مطلوب است که در بافتهای مختلف ودر مراحل متفاوت رشد گیاه کلزا باعث بیان ژن مورد نظر می‌گردد. لذا میتوان نتیجه گرفت که احتمالاً استفاده از پروموتور CaMV 35S در ناحیة بالا دست سایر ژنهای مفید زراعی برای انتقال ژن به کلزا مناسب است. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| پروتئین؛ پروموتور CaMV 35s؛ ژن GUS؛ ژن گزارشگر؛ کاروتنوئید؛ کلروفیل؛ کلزا | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| - | ||
| چکیده [English] | ||
| Considering the fact that a great part (more than 90%) of edible oil consumed in Iran is imported, increasing the domestic oil seed production is necessary to reduce this dependence. Among oil plants, rapeseed (Brassica napus) is most suitable and breeding on this plant is necessary for quality and quantity of its oil. Due to the fact that classical plant breeding methods are time consuming, expensive and incases impossible, therefore the new methods of biotechnology and genetic engineering are inevitably used in place of classical methods. In transferring useful genes to plants, the most important part of each gene is the promoter. The purpose of this research was to investigate the precise activities of promoter using the GUS reporter gene. For optimum results, CaMV 35S (Cauliflower mosaic virus) could be used as a suitable promoter regarding gene expression, and to control other genes. To achieve this, in a separate project of the GUS reporter gene (?-glucuronidase) behind cauliflower mosaic virus promoter had been coloned and introduced to rapeseed. The seeds of 7 transformed rapeseed plants (T0) with this gene as well as the control seeds (non-transformed) were planted in greenhouse. Total soluble protein content was extracted from the leaves at 4 different stages of growth (Rosette, Young Green, Mature Green and Senescence leaves), protein concentrations being spectrophotometrically measured. The amounts of chlorophyll a, b and carotenoid were determined according to the absorbance rates of extracts at 470, 646, 663 nm, the data were collected, and statistically analyzed. The results showed no significant difference between transgenic plants and control in terms of protein, chlorophyll and their carotenoid contents. In different stages of plant growth, variable amount of pigments were observed and in mature green stage these pigments reached their apex level. Besides the study of the quantity of chlorophyll, carotenoid and protein, the protein patterns were studied too using SDS-PAGE method. The results showed no new recognizable band in either transgenic or control plants at any stage. With regard to the results, when comparing chlorophyll, carotenoid and protein (quantitatively and qualitatively), one can conclude that transfer of GUS gene downstream of CaMV 35S promoter to rapeseed can not cause significant changes in the amount of either pigments or total soluble protein. Thus it’s suitable to use promoter CaMV 35S upstream of useful genes for transferring genes to rapeseed. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| CaMV 35S promoter, carotenoid, Chlorophyll, Gus gene, Protein, rapeseed, Transgenic plant | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,877 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 2,962 |
||